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the target sequence
Klonierung und Sequenzierung der Targetsequenz in das Reporterkonstrukt
cloning and sequencing the target sequence into the reporter construct
Sonde nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Basensequenz der Sonde zu der in der Targetsequenz vorliegenden Basensequenz perfekt komplementär ist.
The probe of any one of claims 1 to 3, wherein the base sequence of said probe is perfectly complementary to the base sequence present in the target sequence.
Verfahren gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass ein Ribozym, welches geeignet ist, die Mutationssequenz oder die Target-Nukleinsäure zu spalten, verwendet wird, um die getrennte Detektion der Targetsequenz und der zugegebenen Moleküle zu ermöglichen.
Method according to any of claims 1-3, characterized in that a ribozyme capable of cleaving the mutant sequence or target nucleic acid is used to allow the target sequence and the added molecules to be detected separately.
Verfahren nach Anspruch 1, worin der Schritt des Detektierens des Hybridisierungskomplexes das Bestimmen der Kopienzahl der Targetsequenz umfasst.
The method of claim 1, wherein the step of detecting the hybridization complex comprises determining the copy number of the target sequence.
Verfahren nach Anspruch 33, welches das Hybridisieren des einstrangigen Targetpolynukleotids zuerst mit einer Primersequenz stromab der Targetsequenz umfaßt, und worin der zweite Primer die Promotorsequenz umfaßt.
A method according to claim 33 which comprises hybridizing the target single-stranded polynucleotide first with a primer sequence downstream of the target sequence and wherein said second primer comprises said promoter sequence.
Verfahren nach Anspruch 1, weiters umfassend das quantitative Bestimmen der Anfangskonzentration der Targetsequenz aus der gemessenen Fluoreszenzpolarisation.
The method of Claim 1 further comprising quantitating the initial concentration of the target sequence from the measured fluorescence polarization.
Verfahren nach Anspruch 22, worin die in Schritt (C) verwendeten Primer einen Bindungsbereich der Targetsequenz hybridisieren, der sich zwischen den Bindungsbereichen der Primer in Schritt (A) befindet.
A method according to claim 22 wherein the primers used in steps (C) hybridize a binding region of said target sequence that locates between the binding regions of the primers in step (A).
Kurz gesagt wird eine Targetnukleinsäure bereitgestellt, die die zu amplifizierende Targetsequenz enthält. Ein erstes Amplifikationsoligomer wird mit dieser Targetnukleinsäure in Kontakt gebracht, indem es mit der Targetsequenz hybridisiert.
In this embodiment, an immobilized primer is contacted with a target nucleic acid. Complementary sequences will hybridize with each other resulting in an immobilized duplex. A second primer is contacted with the target nucleic acid.
Amplikon. Dieser Begriff, der synonym mit „Amplifikationsprodukt" verwendet wird, bezieht sich auf das Nukleinsäuremolekül, das im Rahmen einer Amplifikationsvorschrift erzeugt wird, das komplementär oder homolog zu einer Sequenz ist, die innerhalb der Targetsequenz enthalten ist.
As used herein, the term "probe" refers to a labeled oligonucleotide which forms a duplex structure with a sequence in the target nucleic acid, due to complementarity of at least one sequence in the probe with a sequence in the target region.
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