Klonierung und Sequenzierung der Targetsequenz in das Reporterkonstrukt
Die spezifische Sondensequenz, die komplementär zur Targetsequenz ist, bildet in dieser Konformation die sogenannte Loop-Region.
The specific probe sequence, which is complementary to the target sequence, forms the so-called 'loop' structure in this conformation.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die vorgegebene Targetsequenz die Nucleinsäure ist, die für einen selektierbaren Marker kodiert, welche im zweiten Konstrukt vorhanden ist.
A method as claimed in claim 1, wherein said predetermined target sequence is the selectable marker encoding nucleic acid present in said second construct.
Verfahren nach Anspruch 1, worin der Schritt des Detektierens des Hybridisierungskomplexes das Bestimmen der Kopienzahl der Targetsequenz umfasst.
The method of claim 1, wherein the step of detecting the hybridization complex comprises determining the copy number of the target sequence.
Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 21, wobei der Hybridisierungsbeacon, die Targetsequenz oder beide auf einem Träger immobilisiert wird/werden.
The method of any of claims 8 to 21, wherein the hybridisation beacon, the target sequence or both are immobilised on a support.
Verfahren nach Anspruch 8, wobei die so nachgewiesenen Moleküle und Kopien in standardisierter Weise bestimmt werden, um die Menge der in der Probe enthaltenen Targetsequenz zu bestimmen.
The method of claim 8, wherein the molecules and copies so detected are measured in a standardized manner so as to measure the amount of target sequence contained in the sample.
Verfahren nach Anspruch 33, welches das Hybridisieren des einstrangigen Targetpolynukleotids zuerst mit einer Primersequenz stromab der Targetsequenz umfaßt, und worin der zweite Primer die Promotorsequenz umfaßt.
A method according to claim 33 which comprises hybridizing the target single-stranded polynucleotide first with a primer sequence downstream of the target sequence and wherein said second primer comprises said promoter sequence.
Sonde nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Basensequenz der Sonde zu der in der Targetsequenz vorliegenden Basensequenz perfekt komplementär ist.
The probe of any one of claims 1 to 3, wherein the base sequence of said probe is perfectly complementary to the base sequence present in the target sequence.
Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, wobei das Verfahren zum Nachweisen, Ermitteln oder quantitativen Bestimmen der Anwesenheit oder der Menge der in einer Probe vorliegenden Targetsequenz angewendet wird.
The method of claims 8 or 9, wherein the method is used to detect, identify or quantitate the presence or the amount of target sequence present in a sample.
Verfahren nach Anspruch 12, worin das Nukleinsäuremolekül, das die Targetsequenz enthält, mit einem Konkurrenznukleinsäuremolekül coamplifiziert wird.
A method as claimed in claim 12 wherein the nucleic acid molecule which contains the target sequence is co-amplified with a competitor nucleic acid molecule.
Methode nach Anspruch 1, wobei die mindestens eine Targetsequenz eine Verunreinigung in dem Fluidmedium ist und die Methode bestimmt, ob die Konzentration der Verunreinigung eine maximal zulässige Konzentration der Verunreinigung in dem Fluidmedium übertrifft.
A method as claimed in claim 1, wherein said at least one target sequence is a contaminant in said fluid medium, and said method determines whether said concentration of said contaminant exceeds a maximum allowable concentration of said contaminant in said fluid medium.
Verfahren gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass ein Ribozym, welches geeignet ist, die Mutationssequenz oder die Target-Nukleinsäure zu spalten, verwendet wird, um die getrennte Detektion der Targetsequenz und der zugegebenen Moleküle zu ermöglichen.
Method according to any of claims 1-3, characterized in that a ribozyme capable of cleaving the mutant sequence or target nucleic acid is used to allow the target sequence and the added molecules to be detected separately.
Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin den Schritten (a) bis (e) Amplifikation des Nukleinsäuremoleküls, das die Targetsequenz enthält, vorausgeht.
A method as claimed in any of the preceding claims wherein steps (a) to (e) are preceded by amplification of the nucleic acid molecule which contains the target sequence.
